科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的：建立一种基于CRISPR/Cas13a的TP53 R248W变异体的快速检测技术。方法：根据Over-lap PCR技术，以TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒；对TP53R248W变异体扩增产物大小，扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化，初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法；利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆ctDNA，评价CRISPR/Cas13a方法的检测灵敏度。结果：建立的CRISPR/Cas13a方法成功检测出产物大小为368 bp的TP53R248W片段；在0.05～0.25μmol/L浓度范围内，crRNA浓度越高，检测结果相对荧光值越高；该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104拷贝/μL，最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、特异等优点，为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。
- 单位
