化疗药物通过下调miR-148b对乳腺癌细胞ER-α甲基化影响

作者：李泳澄; 孙丽; 马晓燕; 鹿存涛; 韩正祥; 曹苏生^*

来源：中华内分泌外科杂志, 2019, (05).

• 乳腺癌
• 甲基化
• 雌激素受体
• miR-148b

目的 研究常用化疗药物对人乳腺癌细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达和甲基化的影响。方法 采用剂量递增法,分别以紫杉醇(paclitaxel,PTX)和表柔比星(epirubicin,EPI)诱导>6个月,检测药物干预前后人乳腺癌细胞MCF-7(ER+,Luminal A)ER-α的表达和甲基化。用miRNA芯片筛选两种药物干预后MCF-7细胞中表达变化一致的miRNA,并以定量PCR(qPCR)验证。生物信息分析下调最显著的miRNA的靶点,将miRNA抑制剂(inhibitor)转染至MCF-7细胞,将miRNA模拟物(mimic)转染至MCF-7/PTX与MCF-7/EPI细胞,Western blot检测ER-α、DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表达情况,定量甲基化特异性PCR(qMSP)检测ER-α甲基化。结果 建立对PTX耐药的MCF-7/PTX细胞株,对EPI耐药的MCF-7/EPI细胞株。药物干预后,均引起ER-α蛋白表达下降、甲基化水平升高,伴随DNMT1和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)的表达上调,筛选出药物干预后MCF-7细胞中表达变化一致的miRNA,并经qPCR验证,其中下调最显著的是miR-148b。经生物信息学分析,通过荧光素酶报告基因实验(Luciferas)证实DNMT1是miR-148b的直接靶点。miR-148b inhibitor引起MCF-7细胞中ER-α表达降低、甲基化水平升高及DNMT1的表达增高；miR-148b mimic引起MCF-7/PTX与MCF-7/EPI细胞中ER-α表达升高、甲基化水平降低及DNMT1的表达降低。结论 化疗药物(以PTX和EPI为代表)诱导MCF-7细胞中miRNA表达紊乱,下调的miR-148b对DNMT1表达的抑制作用减弱,进而促使ER-α发生高甲基化,表达下调。

• 单位
  解放军武汉总医院; 徐州医科大学