脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响

作者：秦祎; 胡文洁; 方小伟; 郭骞; 田篮鑫; 刘芳^*; 方春^*

来源：畜牧兽医学报, 2023, 1-14.

• 产单核细胞李氏杆菌
• 磷壁酸
• 脂磷壁酸合成酶
• 基因缺失
• 致病性

本文旨在构建脂磷壁酸合成酶ltaS基因缺失株，探讨ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌致病力的影响。本研究利用同源重组技术构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株，通过生物学特性试验探究ltaS基因缺失株对产单核细胞李氏杆菌生长能力和菌体形态的影响，Western blot试验探究亲本株EGDe-prfA*、缺失株ΔltaS对InlA和InlB在细菌表面的锚定情况；使用鸡胚成纤维DF-1细胞进行细胞黏附侵袭试验、小鼠RAW264.7细胞进行吞噬试验与巨噬细胞内增殖试验测定ltaS基因对产单核细胞李氏杆菌侵染能力的影响；小鼠脏器细菌载量和小鼠存活实验评估ltaS基因缺失对产单核细胞李氏杆菌致病性的影响。结果显示：利用同源重组技术成功构建产单核细胞李氏杆菌ltaS基因缺失株，生长曲线试验和光学显微镜观察发现ltaS基因不影响产单核细胞李氏杆菌在BHI中正常生长和细菌形态，通过Western blot试验验证ltaS基因缺失导致细菌表面毒力InlA和InlB锚定量降低。细胞黏附侵袭试验结果表明，ΔltaS对DF-1的黏附率极显著低于亲本株EGDe-prfA*(P<0.01)并且侵袭率也极显著低于亲本株EGDe-prfA*(P<0.01)；吞噬试验发现，小鼠巨噬细胞RAW264.7对ΔltaS的吞噬率与亲本株EGDe-prfA*相比无显著性差异(P>0.05)而在增殖试验中，ΔltaS在RAW264.7中增殖量与亲本株EGDe-prfA*存在显著差异(P<0.05)。小鼠致病力试验结果显示，经ΔltaS感染的小鼠的肝脏、脾脏内细菌载量均显著低于EGDe-prfA*(P<0.01)并且EGDe-prfA*感染后的小鼠96 h内全部死亡，而缺失株ΔltaS感染的小鼠存活率为80%，测定出亲本株EGDe-prfA*半数致死量LD50为1.7×104 CFU，缺失株ΔltaS半数致死量LD50为7.49×106 CFU。综上所述，ltaS基因缺失显著减少表面InlA和InlB的锚定量，减弱产单核细胞李氏杆菌对DF-1细胞的黏附侵袭能力与RAW264.7内细菌增殖能力并且降低对小鼠的致病性。

• 单位
  动物科学学院; 长江大学