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摘要
miR-33在脂类代谢过程中具有重要作用,同时还参与葡萄糖代谢、炎症反应以及细胞周期等多种生理过程。目前对于鸡(Gallus gallus) miR-33的功能及其与预测靶基因—胆碱磷酸转移酶1基因(choline phosphotransferase 1, CHPT1)的作用关系尚不明确。本研究旨在对鸡miR-33预测靶基因CHPT1进行实验验证,探讨鸡miR-33对CHPT1的靶向调控作用。首先利用生物信息学方法,在鸡3’-UTR数据库中共预测到378个miR-33的靶基因,包括与脂类代谢相关的CHPT1基因;然后构建miR-33过表达载体和CHPT1荧光素酶报告载体,共转染小鼠(Mus musculus)成肌细胞系C2C12,结果显示,miR-33的种子区与CHPT1预测靶位点结合,CHPT1基因表达因此被抑制;点突变实验证实了miR-33与CHPT1结合的靶位点。设计并合成miR-33拮抗物LNA (locked nucleic acid)-antimiR-33,转染鸡原代肝细胞后使miR-33表达水平下降44%,而CHPT1基因表达量有一定程度上升。利用qRT-PCR技术对miR-33的表达进行分析,结果显示,miR-33在鸡不同组织中均有表达,在肌胃和心脏中的表达量较高,在其他组织中等表达;miR-33在肌胃中的表达量与脾脏、肾脏、脑和腺胃中的表达量差异显著(P<0.05),与肝脏和腿肌中的表达量差异极显著(P<0.01);miR-33在4周龄高脂肉鸡肝脏和腹脂组织中的表达量显著高于低脂肉鸡(P<0.05);靶基因CHPT1在高脂肉鸡腹脂组织中的表达量显著高于低脂肉鸡(P<0.05)。上述实验结果提示,miR-33与鸡脂类代谢和脂肪沉积相关,CHPT1基因是其潜在的靶基因。本研究为揭示鸡脂类代谢调控机理提供了新的线索。
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