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摘要
为了探究适用于分离水稻内生细菌的方案以获得水稻内细菌新资源，本研究基于培养组的方法，以水稻3个品种种子及幼苗为材料，从材料表面消毒、菌悬液的制备和培养基配比3个方面进行探究，并对分离获得代表性纯培养物的16S rRNA基因进行测序鉴定。结果表明，75%乙醇和含2%有效氯的次氯酸钠溶液组合对种子先后处理90 s和12 min，对植株组织先后处理90 s和5 min即可获得良好的消毒效果。水稻种子内生细菌量为105-106 CFU/g，其中90%-95%分布于颖壳内，不同品种或同一品种的不同生境来源的种子之间内生细菌群落组成有明显差异；在制备种子菌悬液时需注意控制研磨程度以获得种类丰富的菌落，剥去颖壳有利于分离培养糙米中的内生菌。对于根、茎、叶内生细菌的分离，需要根据材料不同控制接种菌悬液的浓度以获得其中微量的内生细菌；在培养基中添加组织浸提液和延长培养时间至两周以上，可促进根、茎、叶内生细菌的分离培养。采用调整后的方案，本研究对3个水稻品种的种子和它们的植株根、茎、叶内生细菌进行分离培养，分别完成了71、14、10和2个代表性纯培养物的16S rRNA基因测序鉴定，其中有8株与已知类群模式菌株同源序列相似度在97.22%-98.74%，新种获得率为8.25%。研究结果为分离培养水稻内生细菌新资源提供了方法参考。
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单位中央民族大学; 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所; 上海市园林科学规划研究院
