DKK2基因质粒的构建及其在敖汉细毛羊成纤维细胞中表达量的研究

作者：王雷; 刘猛; 荣恒; 柳楠; 贺建宁^*

来源：中国畜牧杂志, 2022, 58(05): 131-136.

DOI：10.19556/j.0258-7033.20210625-06

• 敖汉细毛羊
• DKK2基因
• 过表达
• 成纤维细胞

本研究旨在探究DKK2基因过表达后在敖汉细毛羊成纤维细胞中的表达量变化。采集40日龄敖汉细毛羊胎羊皮肤组织作为实验样品，首先参照GenBank中绵羊的DKK2基因序列信息进行引物设计，通过PCR反应对DKK2基因进行扩增，并与pGM-T载体进行连接反应，构建了pGM-T-DKK2重组质粒；将克隆载体转化DH5α大肠杆菌感受态细胞，进行目的片段的克隆；鉴定正确后构建pcDNA3.1-DKK2重组质粒；并将pcDNA3.1-DKK2重组质粒转染敖汉细毛羊成纤维细胞，检测过表达载体对成纤维细胞DKK2基因的表达水平变化。酶切、测序鉴定结果显示，成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体，并且转染敖汉细毛羊成纤维细胞后DKK2基因实验组的表达量极显著高于对照组；Western Blot实验结果显示，实验组的蛋白表达水平极显著高于对照组。本实验成功构建了pcDNA3.1-DKK2过表达载体，并成功转染了敖汉细毛羊成纤维细胞，为进一步研究DKK2基因的功能奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 青岛农业大学