竹花叶病毒SYBR GreenⅡ反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：朱丰晓; 陈家璐; 张智俊^*

来源：农业生物技术学报, 2019, 27(04): 752-760.

• 竹花叶病毒(BaMV)
• SYBR GreenⅡ
• 反转录实时荧光定量PCR (RT-qPCR)

竹花叶病毒(Bamboo mosaic virus, BaMV)是目前为止被发现感染竹类植物唯一的RNA病毒,严重影响竹类植物经济价值。因此,快速准确检测BaMV,对其预防和控制具有重要意义。本研究参考BaMV外壳蛋白基因(coat protein, CP)保守区设计2对特异性引物,运用反转录实时荧光定量PCR (reverse transcription real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR)法对该病毒进行定性和定量分析,建立了一套基于SYBR GreenⅡ的BaMV的RT-qPCR检测体系。该检测体系的标准曲线循环阈值(Ct)与模板浓度的对数呈现良好的线性关系,扩增效率和相关系数分别为100%和0.999。重复性实验表明组内及组间变异系数均在1.5%以内。同时,利用此方法首次检测到8个不同竹种中亦存在BaMV。结果表明,SYBR GreenⅡRT-qPCR检测竹花叶病毒的方法灵敏、特异、重复性好,可用于竹花叶病毒的快速检测。

• 单位
  浙江农林大学