实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB培养基和血中对抗生素的药物敏感性

作者：马恩陵; 廉东波; 李云玖; 张立阳; 谢秀丽; 徐英春; 蒋朱明

来源：中华临床营养杂志, 2006, (04): 212-216.

• 实时定量PCR
• 抗生素药物敏感性
• 大肠埃希菌

目的建立以实时定量PCR快速检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素药物敏感性的方法。方法临床血培养获得大肠埃希菌株,以常规纸片法检测其对抗生素的药物敏感性。分别在LB液体培养基和健康人新鲜全血中加入该大肠埃希菌至终浓度为0·5麦氏单位,采用不加抗生素的标本作为生长对照组,加入耐受或敏感的抗生素的标本作为耐受药物组或敏感药物组,37℃震荡培养,分别提取0、1、2、3、4小时的基因组DNA,以大肠埃希菌特异β-右旋半乳糖苷酶基因的引物和TaqMan探针,对标本进行实时定量PCR检测。结果实时定量PCR方法有较好的重复性(CT值变异系数0·26%~1·56%)和精确度(大肠埃希菌DNA提取效率在LB培养基中为43·6%,在血中为26·7%),标准曲线线性关系好(R2≥0·998)。培养1~3小时后,耐受药物组与生长对照组的大肠埃希菌DNA拷贝数均呈对数增长,在LB液体培养基中增至约19~120倍,在新鲜全血中增至约6~11倍;敏感药物组大肠埃希菌DNA拷贝数呈减少趋势,在LB液体培养基中减至0·22~0·12倍,在新鲜全血中为1·29~0·14倍。上述药敏结果与常规纸片法一致。结论采用实时定量PCR检测大肠埃希菌在LB液体培养基和健康人全血中对抗生素的药物敏感性,结果与常规纸片法一致,但更快速。

• 单位
  中国协和医科大学; 中国医学科学院; 北京协和医院