D407A/D430A双位点突变对嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶GTamy酶学性质的影响

作者：曾静; 郭建军; 袁林

来源：食品工业科技, 2018, 39(14): 103-109.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2018.14.019

• 嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶
• 生淀粉结合域
• Ca2+结合位点
• 定点突变
• 酶学性质

旨在研究位于嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶GTamy的结构域A与生淀粉结合域RSBD间的Ca2+结合位点对其酶学性质的影响,构建了GTamy的Ca2+结合位点突变体GTamy D407A/D430A,并比较了GTamy与突变体GTamy D407A/D430A的酶学性质。结果表明,与GTamy相比,突变体的高温活性和热稳定性明显降低。突变体于80℃的比活力由1 756.75 U/mg降低至1 484.48 U/mg;80℃的半衰期由3 h降低至2.5 h。以可溶性淀粉为底物时,突变体的底物结合能力不变,反应速率为GTamy的79%;以玉米淀粉为底物时,突变体的底物吸附率为GTamy的67.9%,底物降解率为GTamy的59.3%。该Ca2+结合位点可能通过改变RSBD和催化活性中心的分子结构来影响GTamy的高温活性和热稳定性。本研究表明该Ca2+结合位点有利于GTamy维持高温活性和热稳定性。

• 单位
  江西省科学院微生物研究所