靶向干扰DNA－PKcs表达抑制胶质瘤细胞恶性表型及增敏替莫唑胺疗效的分析

作者：张治华; 范新义; 赵梓彤; 宋咏梅^*; 于春江^*

来源：中华医学杂志, 2017, 97(31): 2463-2467.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2017.31.017

• 神经胶质瘤
• RNA干扰
• 侵袭
• 替莫唑胺

目的研究DNA依赖的蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)的表达对胶质瘤细胞生长、侵袭、以及化疗敏感性等生物学行为的影响, 并探讨其潜在机制。方法选取人胶质瘤细胞系H4、U87细胞, 分别转染阴性对照(空白对照组)和DNA-PKcs小干扰RNA(siRNA, 实验组), 利用实时定量PCR(qPCR)与蛋白质免疫印迹技术检测敲降效率;随后, 分别采用MTS法检测细胞生长、Transwell小室模型检测细胞侵袭能力, 以及利用MTS法检测替莫唑胺半数致死剂量(IC50), 探究低表达DNA-PKcs对胶质瘤细胞系上述生物学行为的影响。结果与空白对照组相比, DNA-PKcs特异性siRNA能显著降低靶基因mRNA与蛋白的表达水平;MTS检测发现, 实验组细胞72 h生长能力仅为对照组的52.48%、54.70%(H4细胞)以及52.98%、50.45%(U87细胞);Transwell小室模型检测显示, 空白对照组与实验组细胞侵袭能力分别为1.00±0.03、0.41±0.05、0.39±0.04(H4细胞)以及1.00±0.02、0.28±0.04、0.27±0.04(U87细胞);同时, 低表达DNA-PKcs还能显著降低替莫唑胺(TMZ)的IC50值(H4细胞:249±27, 97±39, 88±35;U87细胞:485±41, 86±49, 73±38);利用免疫印迹技术深入探究降低DNA-PKcs对上述表型影响的潜在机制, 结果发现AKT信号通路活性随DNA-PKcs表达水平的降低而下调;相较于空白对照组, 实验组中AKT下游效应蛋白, 例如c-Myc、MMP9及Survivin表达水平也存在不同程度的下调。结论降低DNA-PKcs表达水平能显著抑制胶质瘤细胞生长、侵袭能力, 增强替莫唑胺的治疗敏感性, 其机制主要与抑制AKT信号通路以及下游效应分子表达水平有关。

• 单位
  分子肿瘤学国家重点实验室; 中国医学科学院肿瘤医院; 首都医科大学