NF-κB参与感染诱导血管内皮细胞DcR3表达升高的初步研究

作者：陈洪卫; 侯彦强^*

来源：国际检验医学杂志, 2022, 43(05): 585-590.

• 内毒素
• 脂磷壁酸
• 酵母聚糖
• 人血管内皮细胞
• 诱骗受体3

目的 利用体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)实验研究核转录因子-κB(NF-κB)参与感染诱导诱骗受体3(DcR3)表达升高的信号转导机制。方法 针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖(LPS)0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸(LTA)5、50、500 ng/mL和酵母聚糖(zymosan)10、100、1 000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组：LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组(未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC)。流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2(TLR2)和TLR4的表达，采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中DcR3的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平，Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达。结果 流式细胞术检测HUVEC细胞表面TLR2和TLR4的表达分别为(82.23%±2.15%)和(77.87%±1.06%)。以低、中、高3个浓度刺激HUVEC细胞后，与对照组相比，低浓度组上清液中DcR3水平无明显升高；中、高浓度组DcR3水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(均P<0.05);高浓度组DcR3水平比中浓度组明显增高，差异有统计意义(均P<0.05);随着时间延长，高浓度刺激后的HUVEC细胞上清液中DcR3的表达与对照组相比明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、高浓度LPS组、高浓度LTA组以及高浓度zymosan组细胞内DcR3 mRNA的相对表达水平分别为(1.00±0.05)、(2.28±0.26)、(1.98±0.30)、(2.10±0.16)。3种刺激物组的DcR3 mRNA和DcR3蛋白表达明显升高，与对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.01)。刺激12 h后，细胞内DcR3 mRNA的表达即明显升高，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。加入NF-κB抑制剂PDTC后，细胞上清液以及细胞内DcR3表达较未加抑制剂组明显下降，差异有统计学意义(P<0.05),而加入P38 MAPK抑制剂U0126和PD9859后，细胞上清液及细胞内DcR3的表达无明显影响。结论 LPS、LTA以及zymosan通过激活NF-κB信号通路诱导HUVEC表达DcR3。

• 单位
  上海市松江区中心医院