原花青素介导的自噬流对喉癌细胞增殖影响及其机制探讨

作者：刘炜; 于锋^*; 周毅波; 龚辉成; 张群慧; 艾毛毛

来源：中华肿瘤防治杂志, 2018, 25(20): 1413-1421.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2018.20.002

• 原花青素
• PI3K/AKT通路
• 喉癌
• 自噬流

目的原花青素(procyanidins,OPC)通过抑制细胞周期、促进凋亡等机制发挥抗肿瘤作用。本研究旨在探讨OPC介导的自噬流对喉癌TU686细胞增殖活力的影响,并进一步探究OPC促进喉癌TU686细胞自噬流可能的分子机制。方法单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色法及流式细胞术检测不同浓度OPC对TU686细胞自噬的诱导作用;蛋白质印迹法检测TU686细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白表达变化;并从翻译水平检测相关Atg蛋白表达,使用SiRNA干扰Atg5基因,并采用q-PCR和蛋白质印迹法检测干扰后Atg5转录和翻译水平变化,进一步检测干扰Atg5对LC3-Ⅱ和p62影响;检测PI3K/AKT途径中活化PI3Kp85α和磷酸化P-AKT1蛋白表达情况,采取PI3K/AKT途径激动剂胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与OPC共培养细胞的方式以阐明PI3K/AKT途径在OPC诱导的自噬流中具体作用。CCK-8法和台盼蓝染色法检测OPC诱导的自噬流对TU686细胞增殖活力影响。结果 OPC处理组(20～40μg/mL)LC3-Ⅱ相对蛋白表达量高于0加药组,F=1 688.710,P<0.001;p62相对蛋白表达量低于0加药组,F=73.875,P<0.001。40μg/mL OPC作用后Atg5和Atg12蛋白相对表达量分别为3.20±0.08和7.52±0.13,高于0加药组,F值均为-3.079,P值均为0.012;40μg/mL OPC作用后PI3Kp85α和P-AKT1蛋白相对表达量分别为0.18±0.01和0.48±0.06,低于0加药组,F值均为3.079,P值均为0.012。IGF-1可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ升高和p62降低,与CON组相比,OPC组、IGF-1组和OPC+IGF-1组LC3-Ⅱ相对表达量分别为10.32±0.31、1.02±0.20和5.73±0.11,均P<0.001;p62相对表达量分别为0.64±0.02、1.03±0.02和0.87±0.01,均P<0.001。3-MA预处理后可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+3-MA组LC3-Ⅱ蛋白相对表达量分别为4.74±0.10、1.05±0.13和1.81±0.05,均P<0.001;p62蛋白相对表达量分别为0.59±0.02、0.94±0.03和0.78±0.03,P值分别为<0.001、0.002和<0.001。SiRNA干扰Atg5后,抑制OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与NC相比,NC+OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+OPC组中LC3-Ⅱ相对表达量分别为9.43±0.36、1.14±0.11和6.08±0.22,均P<0.001;p62相对表达量分别为0.28±0.02、1.03±0.02和0.68±0.02,均P<0.001。CCK-8结果显示与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+3-MA组细胞活力分别为(49.53±4.29)%、(95.29±1.80)%和(67.19±0.31)%,P值分别为<0.001、0.001和<0.001。与CON组相比,NC+OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+OPC组细胞活力分别为(49.53±4.29)%、(100.44±0.50)%和(73.01±1.23)%,均P<0.001。结论OPC可能通过抑制PI3K/AKT途径促进喉癌TU686细胞自噬流的通畅,并抑制TU686细胞增殖活力。

• 单位
  广州医科大学