MAGE-D1对大鼠牙胚来源外胚间充质干细胞增殖迁移能力的影响

作者：杨琨; 李骏; 丰奇昊; 沈梦杰; 陈谦谦; 罗雅馨; 刘琪^*; 温秀杰^*

来源：遵义医学院学报, 2018, 41(05): 569-575.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2018.0115

• 黑色素瘤相关抗原D1
• 外胚间充质干细胞
• 增殖
• 迁移
• WNT信号通路

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(Melanoma associated antigens,MAGE-D1)对大鼠牙胚来源的外胚间充质干细胞(Ectomensenchymal stem cells,EMSCs)增殖及迁移能力的影响。方法取SD大鼠孕19. 5 d胎鼠牙胚组织,组织块法培养牙胚来源外胚间充质干细胞,流式细胞仪进行外胚间充质干细胞表面分子鉴定CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166和p75NTR,MAGE-D1 siRNA转染入外胚间充质干细胞,实验组分为:对照组(Control)和MAGE-D1 siRNA组(MAGEsiRNA-EMSCs),CCK8法和划痕法分别检测两组细胞增殖能力与迁移能力,Real Time-PCR及Western blot检测迁移及WNT通路相关基因MAGE-D1、β-catenin、E-cadherin的mRNA及蛋白表达量。结果组织块法成功培养出牙胚来源的外胚间充质干细胞,经流式细胞仪检测细胞阳性表达CD14(92. 16%)、CD29(94. 53%)、CD44(99. 51%)、CD90(95. 18%)、CD105(34. 22%)、CD146(92. 39%)、CD166(98. 15%)和p75NTR(88. 56%),阴性表达CD45(0. 5%);CCK8法检测MAGE-D1 siRNA组EMSCs增殖能力受到抑制;划痕试验法检测MAGE-D1 siRNA组细胞48 h迁移量高于对照组细胞;Real Time-PCR检测Mage-D1、β-catenin和E-cadherin表达量,MAGE-D1 siRNA组EMSCs MAGE-D1和E-cadherin表达较对照组低,而β-catenin表达较高,Western blot检测MAGE-D1、β-catenin和E-cadherin表达水平趋势与Real Time-PCR结果相一致。结论抑制EMSCs中MAGE-D1的表达上调β-catenin,下调E-cadherin,能够提高细胞的迁移能力,但是其导致增殖能力降低,MAGE-D1可能作为EMSCs迁移增殖能力的关键因子。

• 单位
  大坪医院; 遵义医学院附属口腔医院; 中国人民解放军陆军军医大学