羊口疮病毒115基因的克隆及原核表达

作者：林裕胜; 黄丽丽; 江锦秀; 张靖鹏; 刘维巍; 刘庆华; 胡奇林^*

来源：福建农业学报, 2022, 37(07): 850-854.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2022.007.005

• 羊口疮病毒
• 115基因
• 克隆
• 原核表达

【目的】获得羊口疮病毒（ORFV）115基因表达蛋白。【方法】利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物，以ORFV FJ-ND株基因组为模板，通过PCR技术扩增获得其基因序列，再将115基因克隆至pGEX-6p-1上，重组质粒pGEX-6p-115，并对其进行测序鉴定，鉴定正确后转化RosettaganmiB(DE3)感受态细胞，通过优化IPTG浓度和诱导时间获得重组融合蛋白最佳表达条件，用SDS-PAGE对表达的目的蛋白进行分析。【结果】115基因全长450 bp，编码149个氨基酸；115基因可以在RosettaganmiB中表达，重组蛋白分子大小约42 kDa，主要以包涵体形式表达。【结论】成功克隆了ORFV 115基因，构建了pGEX-6P-115原核表达质粒，优化了重组蛋白表达条件并进行纯化，为进一步探索ORFV 115蛋白在感染宿主过程中的机制和作用奠定基础。

• 单位
  福建省农业科学院; 新疆生产建设兵团; 动物科学学院; 福建农林大学