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摘要
二硫键的正确配对维持了多肽和蛋白类药物的正确折叠方式和高级结构的形成，对产品的质量控制至关重要。为了确保二硫键正确配对，二硫键分析是多肽和蛋白质药物表征中必不可少的重要部分。质谱分析技术可用于二硫键分析，然而，胰岛素及其类似物中存在两对没有酶切位点的二硫键，常规的碰撞诱导解离（CID）和高能诱导裂解（HCD）无法实现该复杂二硫键的准确定位。本研究通过3种方法综合定位该复杂二硫键，包括酶切加关键肽段源内碎裂（ISD）法、酶切加部分还原烷基化法、完整蛋白源内碎裂和电子转移解离（ETD）裂解法，并且考察了门冬胰岛素、赖脯胰岛素和甘精胰岛素的适用性，为胰岛素及其类似物二硫键连接方式的质量控制提供了新途径，也为含该类复杂二硫键多肽或蛋白类生物制品的二硫键定位提供借鉴。
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单位中国食品药品检定研究院
