科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
背景：已有研究表明汉防己甲素可以通过激活AMPK信号通路诱导细胞自噬从而抑制肿瘤细胞增殖，但目前汉防己甲素诱导破骨细胞自噬和分化的相关研究甚少。目的：探究汉防己甲素在不同浓度下对破骨细胞分化和自噬的影响，并分析诱导破骨细胞自噬能否起到抑制其分化的作用。方法：（1）第一部分：使用重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体两种细胞因子对小鼠RAW264.7巨噬细胞进行诱导，使其向破骨细胞转化。细胞诱导及药物干预分组如下：空白对照组（完全培养基），阳性对照组（含两种细胞因子），低、中、高剂量汉防己甲素干预组（阳性对照组分别添加0.1,0.5,1.0μmol/L汉防己甲素）。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测组织蛋白酶K（CTSK）、自噬微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）和自噬底物泛素结合蛋白（p62）的蛋白相对表达量；RT-PCR检测CTSK、LC3-Ⅱ和p62的mRNA相对表达量；丹酰尸胺（MDC）染色观察诱导过程中破骨细胞中自噬小体的数量变化。（2）第二部分：选取抑制破骨细分化效果最明显的汉防己甲素浓度（1.0μmol/L）进行回复性验证。各组处理如下：阳性对照组（含两种细胞因子），自噬抑制剂组（巴佛洛霉素处理），药物干预组（汉防己甲素干预），药物干预+自噬抑制剂组。抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察成熟破骨细胞数量变化；Western blot法检测CTSK的蛋白相对表达量。结果与结论：（1）一定浓度汉防己甲素能够对破骨细胞的分化起抑制作用，并且抑制作用随药物浓度升高而提升；（2）汉防己甲素在一定浓度下能够激发破骨细胞分化过程中自噬标志物的表达及减少自噬特异性底物累积，并在破骨细胞分化过程中可刺激自噬小体形成；（3）使用自噬抑制剂后，汉防己甲素抑制破骨细胞分化的作用受到显著影响；（4）综上，一定浓度的汉防己甲素能够通过激活自噬抑制破骨细胞的分化。
- 单位
