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摘要
目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对脓毒症相关血小板活化的作用。方法①临床试验:采用前瞻性研究方法, 选择2021年1月至10月滨州医学院附属医院重症医学科收治的年龄≥18岁且符合脓毒症3.0诊断标准的脓毒症及脓毒性休克患者作为研究对象;以同期健康体检者作为对照。记录患者入院后第1次血常规中血小板计数(PLT);并于确诊1 d取静脉血, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清PCSK9水平。比较两组PCSK9水平及PLT的差异, 并针对脓毒症患者根据PLT进行亚组分析;采用Pearson相关法分析脓毒症患者PCSK9水平与PLT的相关性。②动物实验:将80只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、脓毒症模型组〔脂多糖(LPS)组〕、PCSK9抑制剂预处理组(PCSK9 inhibitor+LPS组)及PCSK9抑制剂对照组(PCSK9 inhibitor组), 每组20只。腹腔注射LPS 12 mg/kg制备脓毒症小鼠模型;对照组和PCSK9 inhibitor组注射等量无菌生理盐水。PCSK9 inhibitor+LPS组及PCSK9 inhibitor组分别于注射LPS或生理盐水前腹腔注射PCSK9抑制剂5 mg/kg预处理7 d;对照组及LPS组注射等量无菌生理盐水。制模后24 h取肺组织进行病理学及免疫组化观察;取心脏血检测PLT;采用流式细胞仪检测血小板活化情况;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测血小板活化标志物CD40L的蛋白表达。结果①临床试验:最终共纳入脓毒症患者57例, 同期27例健康体检者作为对照。脓毒症组血清PCSK9水平较健康对照组明显升高(μg/L:232.25±72.21比191.72±54.92, P<0.05), PLT较健康对照组明显降低〔×109/L:146.00(75.50, 204.50)比224.00(194.00, 247.00), P<0.01〕;进一步亚组分析显示, 脓毒症血小板减少者(n=20)血清PCSK9水平较非血小板减少者(n=37)明显升高(μg/L:264.04±60.40比215.06±72.95, P<0.01)。相关分析显示, 脓毒症患者血清PCSK9水平与PLT呈显著负相关(r=-0.340, P=0.010)。②动物实验:光镜下显示, 对照组与PCSK9 inhibitor组肺组织均无明显病理学改变, 且两组PLT、血小板活化情况及血浆CD40L蛋白表达差异均无统计学意义;LPS组小鼠肺间质可见大量炎症细胞浸润, 肺泡结构破坏明显, 肺泡间隔增厚, 肺泡腔内广泛出血, 毛细血管扩张并存在出血及血小板聚集, PLT明显降低, 血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著增加;而给予PCSK9抑制剂预处理后, 小鼠肺组织炎症细胞浸润较LPS组有一定程度减少, 肺泡间隔增厚减轻, 肺组织血小板聚集减少, PLT显著升高(×109/L:515.83±46.60比324.83±46.31, P<0.05), 血小板活化及血浆CD40L蛋白表达水平显著降低〔血小板α颗粒膜糖蛋白CD62P阳性表达率:(12.15±1.39)%比(18.33±2.74)%, CD40L蛋白(CD40L/β-actin):0.77±0.08比1.18±0.10, 均P<0.05〕。结论脓毒症中PCSK9水平对促进血小板活化有一定的作用, 抑制PCSK9水平对于改善脓毒症血小板减少致不良结局的效果可能具有潜在研究价值。
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