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摘要
目的建立模拟细胞微环境、促进细胞分化的三维培养体系,以体外诱导和培养小鼠胚胎干细胞(mES-D3)来源的心肌细胞。方法将mES细胞通过悬浮培养获得拟胚体(EBs)后转入MatrigelTMMatrix3D培养体系中培养。用形态学观察计数收缩集落的数量和频率;用免疫组织化学和RT-PCR检测心肌细胞分化相关基因的表达。结果在MatrigelTM中培养5 d左右,可观察到自发节律收缩的EBs,频率约为40~50次/min;继续培养3 d左右,频率约为80~90次/min;到45 d左右大部分集落最终收缩。分化为心肌细胞所表达的特异性蛋白cTnT、Desmin和Actin表达呈阳性,并表达心肌特异性基因cTnT、NKX2E、GATA-4和MLC-2v。结论mES细胞来源的EBs在MatrigelTM培养体系中能够分化为心肌细胞,籍此我们建立了一株细胞系。
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单位北京大学深圳医院; 深圳北京大学香港科技大学医学中心; 北京大学第一医院
