基于TLR4/NF-κB通路探讨石斛多糖改善CSE诱导的人支气管上皮细胞炎性损伤

作者：王蕾; 王雅娟; 贺增洋; 许凤清; 王文斌; 王桐生^*; 舒俊生^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 29(23): 64-71.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230805

• 石斛多糖
• 人支气管上皮细胞(16HBE)
• 香烟烟雾提取物(CSE)
• 炎症因子
• Toll样受体4(TLR4)
• 核转录因子-κB(NF-κB)

目的：探讨石斛多糖对香烟烟雾提取物(CSE)损伤的人支气管上皮细胞(16HBE)的炎症因子分泌及TLR4/NF-κB通路活性的影响。方法：体外培养16HBE细胞，设置空白组、CSE损伤组、CSE+石斛多糖组(100、200、400 mg·L-1),CCK-8法检测细胞活力，显微镜观察细胞状态，酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-8、IL-1β、IL-4、IL-13、转化生长因子(TGF)-β含量，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)及IL-4 mRNA的相对表达量，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白细胞介素-4受体(IL-4R)、TLR4、髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及核蛋白NF-κB(NEs-NF-κB)蛋白相对表达量，免疫荧光法检测NF-κB核转位水平。结果：与空白组比较，CSE损伤组细胞存活率降低，细胞皱缩，细胞培养上清中IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量明显增加(P<0.05,P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平显著升高(P<0.01),NF-κB入核现象明显；与CSE损伤组比较，石斛多糖各剂量组细胞存活率显著升高，细胞状态恢复，IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量及TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核明显减少。结论：石斛多糖对CSE诱导的16HBE细胞损伤具有明显的保护作用，其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性有关。

• 单位
  安徽中医药大学; 安徽中烟工业有限责任公司