猪圆环病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

作者：王星; 李杰峰; 张宁; 王华健; 孙艳玲; 杨旭光; 马玉忠; 杨威^*; 翟向和^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(07): 1315-1334.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.07.02

• 猪圆环病毒3型
• 荧光定量PCR
• SYBR GreenⅠ

为建立针对猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，使用DNAStar软件对GenBank中PCV3的ORF1基因进行保守区域分析，并使用Primer Premier 5软件对PCV3 ORF1基因的高度保守区域设计引物，经PCR扩增后构建了PCV3 ORF1基因的标准品质粒，以构建的标准品质粒为模板，分别从退火温度优化、标准曲线和熔解曲线的建立、特异性、灵敏性、重复性等方面对所建立的检测方法进行探究。特异性试验结果显示，建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR特异性良好，仅对PCV3存在特异性扩增，而对其他8种病毒均无扩增；灵敏度试验表明该方法最低检测量为6.55拷贝/μL,是常规PCR的100倍；以浓度为6.55×102～6.55×108拷贝/μL的标准品质粒构建的标准曲线相关系数为0.996,扩增效率可达99.7%;重复性试验结果显示，组内变异系数和组间变异系数均在2%以内。临床试验对100份猪血清进行PCV3检测，结果显示建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的阳性率为16%(16/100),高于常规PCR的阳性率10%(10/100)。结果表明，建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可为PCV3的快速诊断、流行病学调查及防控提供技术支持。

• 单位
  河北农业大学; 河北省畜牧兽医研究所