Notch2高表达可使人主动脉平滑肌细胞骨形态发生蛋白4表达增加促进钙化

作者：顾秀莲; 敬梅; 樊济海; 巢胜吾; 李博; 王玲; 凌秋洋^*

来源：心血管病学进展, 2020, 41(09): 962-971.

DOI：10.16806/j.cnki.issn.1004-3934.2020.09.019

• 人主动脉平滑肌细胞
• Notch2
• JAK-STAT3
• 骨形态发生蛋白4

目的观察并验证人主动脉平滑肌细胞(HASMC)Notch2蛋白表达的变化对其细胞钙化的影响,并探讨其机制。方法体外培养HASMC,将其分为两组,分别为正常对照组与诱导钙化组。前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用钙化诱导剂β-甘油磷酸(5 mmol/L)、抗坏血酸(50μg/mL)和地塞米松(100 nmol/L),两组细胞均培养7 d。另取上述方法诱导钙化的HASMC为钙化对照组,再设钙化抑制组,即在钙化对照组的基础上加入Notch特异性抑制剂γ-内分泌酶抑制剂(50μmol/L),两组细胞均培养7 d。四组均用白介素-6诱导细胞的炎症反应。采用免疫印迹法检测各组细胞内Notch2、磷酸化核转录因子STAT3(p-STAT3)和骨形态发生蛋白4(BMP-4)的蛋白表达水平;酶联免疫法测定各组细胞培养上清液中BMP-4蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应检测诱导钙化组和正常对照组中HASMC Notch2 mRNA的表达;免疫荧光染色法观察钙化对照组与钙化抑制组中HASMC BMP-4蛋白的表达。结果 (1)诱导钙化组中HASMC Notch2、p-STAT3和BMP-4蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);诱导钙化组的培养液上清中BMP-4蛋白含量为(66.42±2.89)pg/mL,明显高于正常对照组的(22.35±2.68)pg/mL(P<0.05);诱导钙化组中HASMC Notch2 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。(2)钙化抑制组中HASMC Notch2、p-STAT3和BMP-4蛋白的表达水平明显低于钙化对照组(P <0.05);钙化抑制组培养液上清中BMP-4蛋白的含量为(22.34±3.82)pg/mL,明显低于钙化对照组的(62.89±3.26)pg/mL(P <0.05)。免疫荧光染色显示钙化抑制组中HASMC BMP-4蛋白表达明显低于钙化对照组。结论钙化的HASMC Notch2蛋白表达增高,促进了BMP-4蛋白表达增加,从而使HASMC发生成骨样改变,使血管发生钙化,这一机制可能与JAK-STAT3的活化有关。