微小RNA-494介导人成纤维细胞生长因子受体2调控骨肉瘤细胞侵袭和迁移的机制

作者：李勇; 龚泰芳; 孙景东; 李彬彬; 李治峰; 蔡林^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(11): 2010-2013.

• 骨肉瘤
• 微小RNA
• 侵袭
• 转移
• 成纤维细胞生长因子受体2

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-494介导成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)调控骨肉瘤细胞侵袭和迁移的机制。方法瞬时转染法上调或下调骨肉瘤143B细胞的miR494水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Western blot检测细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平。采用生物信息学软件Targetscan预测miR494靶基因,并采用双荧光素酶报告实验验证其直接靶作用关系。建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型,给予miR-494 agomir处理,观察上调miR494对荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用。结果 miR494上调组24、48、72 h的细胞吸光度(A)值(0.092±0.014、0.135±0.024、0.323±0.051)分别低于对照组(0.142±0.034、0.247±0.028、0.511±0.042,t=3.261,P=0.025;t=3.512,P=0.013;t=3.992,P=30.007)。miR494下调组24、48、72 h的细胞A值(0. 155±0.012、0. 356±0. 024、0. 746±0. 095)分别高于对照组(0. 086±0.007、0. 218±0.028、0. 557±0. 039, t=3. 026,P=0. 039;t=3. 925,P=0.008;t=4. 261,P=0. 001)。瞬时转染24 h后,miR494上调组细胞跨膜数目(48. 3±11. 4)少于对照组(87.4±14. 6,t=2. 336,P=0. 016),而miR494下调组细胞跨膜数目(128. 3±20.4)多于对照组(88. 7±14. 6,t=2.567,P=0. 012)。miR-494上调组细胞迁移率[(52. 6±8. 7)%]低于对照组[(76. 8±9. 3)%,t=3. 261,P=0.015],而miR494下调组细胞迁移率[(87. 6±7. 6)%]高于对照组[(78. 3±8. 2)%,t=2.428,P=0. 032]。miR-494上调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平低于对照组,而miR-494下调组细胞MMP-2和MMP-9蛋白表达水平高于对照组。FGFR2野生型与miR494模拟物共转染组荧光素酶活性显著低于对照组,上调miR494能抑制骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平,而下调miR494可促进骨肉瘤143B细胞FGFR2的mRNA水平。miR-494 agomir(494-agomir)给药组裸鼠肿瘤体积在给药后14、21、28 d[(237.9±23.8)、(449. 3±26. 8)、(726. 9±58. 7) mm3]分别低于对照组[(356. 8±42. 3)、(678.4±46. 3)、(1 242. 6±59. 4) mm3,t=2. 326, P=0. 025; t=3. 126, P=0. 004;t=3. 659, P=0.001]。结论 miR-494可抑制骨肉瘤143B细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制与调控靶基因FGFR2密切相关。

• 单位
  武汉大学中南医院; 湖北医药学院; 湖北省十堰市太和医院