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摘要
目的在HEK293细胞中研究ASK1巯基亚硝基化对其活性的影响。方法获得ASK1真核表达载体及其869位半胱氨酸突变体,利用脂质体2000高效转染至HEK293细胞。转染后的细胞与外源性NO供体GSNO作用,样品用生物素转化法检测过表达ASK1的巯基亚硝基化,WB检测ASK1磷酸化(活化)。结果过表达的HEK293细胞给予GSNO处理可以使ASK1发生巯基亚硝基化,同时磷酸化升高;Cys869被鉴定为ASK1亚硝基化位点,将其突变为丙氨酸后,GSNO处理ASK1巯基亚硝基化显著降低,同时抑制了ASK1的磷酸化水平升高。结论外源性NO使ASK1发生巯基亚硝基化,ASK1的巯基亚硝基化能升高其磷酸化水平,从而激活ASK1。
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