产油核桃内生细菌乙酰辅酶A羧化酶acb基因克隆及优化表达

作者：许思远; 张永贵; 赵沛; 曹娟娟; 张琴^*

来源：中国油脂, 2023, 48(04): 99-104.

DOI：10.19902/j.cnki.zgyz.1003-7969.220108

• 核桃内生细菌
• 产油
• 乙酰辅酶A羧化酶
• 克隆
• 优化表达

为了探究细菌异质性乙酰辅酶A羧化酶β亚基生物活性及其对乙酰辅酶A羧化酶酶活影响，以高产油核桃内生细菌B.subtilis HB1310基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基(β-CT)基因(acb基因),构建pET-28a-acb载体并在E.coli BL21中表达，进一步对乙酰辅酶A羧化酶acb基因的诱导表达条件进行了优化。结果表明：乙酰辅酶A羧化酶acb基因在E.coli BL21中实现了表达，分子质量在25～35 kDa之间；重组蛋白最佳诱导表达条件为诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度1.0 mmol/L、诱导时间6 h、诱导初始pH 8.0,在此条件下工程菌的乙酰辅酶A羧化酶活性可达(4.11±0.03) U/mL,较野生菌提高39.7%。综上，乙酰辅酶A羧化酶β-CT为具有较好生物活性的乙酰辅酶A羧化酶亚基。

• 单位
  安徽工程大学