荧光定量PCR检测TCR VγI-Jγ基因重排标准品质粒及标准曲线的构建

作者：江小工; 徐兵; 许文娟; 李冰

来源：实用医学杂志, 2004, (02): 115-117.

• 聚合酶链反应
• 基因重排
• 标准曲线
• 质粒 Polymerase chain reaction Gene rearrangement Plasmid Standard curve

目的 :构建荧光定量PCR检测TCRVγI Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线 ,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础。方法 :对TCRVγI Jγ基因进行序列分析 ,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针。提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA ,经PCR扩增 ,产物纯化后与pMD 18 TVector连接 ,转化到大肠杆菌DH5α ,筛选得到标准品的质粒。结果 :重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长 ,表明TCRVγI Jγ基因已成功克隆。以 10 0 ～ 10 -5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增 ,Ct值分别为 2 1 0 8、2 4 3...

• 单位
  南方医科大学; 南方医院