补肾解毒散结方对脱氧胆酸诱导的TGR5活性及人结肠癌细胞侵袭转移的影响

作者：贾茹; 邵诗芸; 倪中亚; 张影茹; 冯媛媛; 王炎^*; 李琦^*

来源：上海中医药大学学报, 2020, 34(02): 48-53.

DOI：10.16306/j.1008-861x.2020.02.009

• 补肾解毒散结方
• 大肠癌
• 脱氧胆酸
• TGR5
• 侵袭转移

目的:探讨补肾解毒散结方对脱氧胆酸(DCA)诱导的TGR5活性和人结肠癌细胞侵袭转移的影响及其可能机制。方法:分别以TGR5稳转HEK293细胞和人结肠癌HCT-116细胞为对象进行实验。将细胞分为对照组和DCA组、DCA+中药低剂量组、DCA+中药高剂量组。除对照组外,其他各组均先给予DCA(30μmol/L)干预;DCA+中药低剂量组和DCA+中药高剂量组再分别给予20μg/ml和60μg/ml补肾解毒散结方醇提液;对照组仅给予等体积的培养基。细胞培养24 h后,双荧光素酶报告基因检测HEK293细胞中TGR5转录活性;划痕实验观察0、12、24 h各组HCT-116细胞的迁移情况,计算细胞迁移率;Western blot检测各组HCT-116细胞表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白表达;ELISA检测各组HCT-116细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果:①双荧光素酶报告基因检测显示,DCA组细胞TGR5转录活性较对照组显著上调(P<0.01);高、低剂量补肾解毒散结方作用后均可显著抑制DCA诱导的TGR5过表达(P<0.01),且DCA+中药高剂量组细胞的TGR5活性明显低于DCA+中药低剂量组(P<0.01)。②细胞划痕实验显示,DCA组细胞12、24 h时迁移率较对照组明显升高(P<0.01);高、低剂量补肾解毒散结方作用后均可显著抑制DCA诱导的HCT-116细胞的迁移,细胞迁移率较DCA组显著降低(P<0.01),且DCA+中药高剂量组的细胞迁移率明显低于DCA+中药低剂量组(P<0.05)。③蛋白表达检测显示,DCA组细胞MMP-2、MMP-9、EGFR蛋白表达和VEGF含量较对照组显著上调(P<0.05,P<0.01);与DCA组相比,高、低剂量补肾解毒散结方作用后均可显著下调MMP-2、MMP-9、EGFR蛋白表达,降低VEGF含量(P<0.01),且DCA+中药高剂量组细胞的MMP-9、EGFR蛋白表达水平和VEGF含量明显低于DCA+中药低剂量组(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾解毒散结方可下调DCA诱导的TGR5过表达,并抑制DCA诱导的人结肠癌细胞侵袭转移。

• 单位
  上海中医药大学; 上海中医药大学附属曙光医院