科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 对柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)14-3-3基因进行克隆表达，对其表达产物进行鉴定及反应原性分析，旨在探索其作为鸡球虫基因工程疫苗候选抗原的可行性。方法 以柔嫩艾美尔球虫RNA为模板，通过RT-PCR扩增14-3-3基因，连接至pET-32a(+)载体，构建重组质粒pET-32a(+)-14-3-3,转化感受态细胞BL21(DE3)后经IPTG诱导表达，利用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化，采用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白的表达及反应原性。结果 经双酶切和测序鉴定，重组质粒pET-32a(+)-14-3-3构建正确。SDS-PAGE检测重组蛋白14-3-3在原核表达系统中主要以可溶性形式表达，融合蛋白的分子质量约为50ku,表达的重组蛋白14-3-3能被相应抗体识别。结论 成功构建重组质粒pET-32a(+)-14-3-3,表达的重组蛋白14-3-3具有反应原性，为该蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
- 单位
