猪囊尾蚴dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

作者：刘振勇; 吕志慧; 郑亚东; 窦永喜; 乔军; 骆学农; 张艳; 景志忠; 才学鹏

来源：中国农业科学, 2010, (01): 192-199.

• dUTP焦磷酸酶
• 猪囊尾蚴
• 原核表达
• 酶学活性 dUTP pyrophosphatase
• cysticercus cellulose
• prokaryotic expression
• enzymatic activity

【目的】克隆、表达猪囊尾蚴dUTPase基因并分析其酶学活性。【方法】通过RT-PCR的方法克隆猪囊尾蚴dUTPase基因,将其与pET载体连接并在原核系统中高效表达;表达产物经Ni柱纯化后进行酶学活性测定。【结果】序列分析表明猪囊尾蚴dUTPase基因与六钩蚴的dUTPase基因核苷酸同源性为100%,而且其氨基酸序列中同样存在5个保守基序。SDS-PAGE显示在21kD附近出现与目的蛋白大小相符的特异条带,表达产物经纯化后dUTPase的含量为2.863mg·mL-1。酶学活性试验证实重组dUTPase能特异性降解dUTP,同时EDTA可以抑制dUTPase的活性;而Mg2+可以增强猪囊尾...

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所