犬肺表面活性蛋白A的克隆及其在昆虫杆状病毒系统的表达

作者：熊海凤; 吴汉文; 黄学婷; 李明; 周倩; 崔雅倩; 祁克宗; 刘红梅

来源：安徽农业大学学报, 2022, 49(03): 449-453.

DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20220705.001

• 犬
• 肺表面活性蛋白A
• 克隆
• 昆虫杆状病毒表达系统
• 表达

利用RT-PCR方法扩增犬肺表面活性蛋白A(canine lung surfactant protein A, cSP-A)基因，将其连接至p MD18-T载体，经测序正确后，使用DNAMAN软件比对不同种属SP-A基因序列；将cSP-A基因片段经双酶切后连接至pFastbac1载体得到pFastbac1-cSP-A；再将其转化至DH10Bac感受态细胞，获得重组Bacmid质粒，然后转染sf9细胞得到P1代重组杆状病毒P1 rBv-cSP-A,P1代病毒连续扩增3代后，取P4 rBv-cSP-A感染sf9细胞表达cSP-A重组蛋白，利用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光试验鉴定表达产物。结果显示cSP-A基因大小为699 bp；不同种属间SP-A的C末端碳水化合物识别结构域的同源性为49.1%～95.5%；经Western Blot和IFA鉴定，重组cSP-A蛋白在细胞内表达未分泌到胞外，分子量大小约为31.84 kDa。

• 单位
  安徽农业大学; 动物科技学院