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摘要
为了获取和发掘α-硫辛酸作用于肝癌细胞后的转录组数据库和Bcl-2家族蛋白差异表达基因,本研究采用高通量测序技术Illumina HiSeqTM2000对BEL-7402细胞的α-硫辛酸处理组和对照组进行转录组测序,再进行系统的生物信息学分析并筛选出Bcl-2家族蛋白相关的差异表达基因。然后通过PCR及Western blotting技术检测部分基因的表达,来验证测序结果的准确性和可靠性。最后再用流式细胞仪检测α-硫辛酸对肝癌细胞系HepG2、BEL-7402凋亡率的影响。本次测序分析共获得4 671个差异表达基因,包括2 223个表达上调,2 448个表达下调。可归类到48个GO (Gene ontology)分类中,KEGG Pathway显著性富集共涉及6条途径,对差异性表达基因进一步筛选得到8个Bcl-2家族蛋白相关基因。PCR及Western blotting分析表明,在肝癌细胞HepG2、BEL-7402细胞中,α-硫辛酸处理组的Bax、Bak促凋亡基因m RNA及蛋白质水平表达均上调,与测序分析结果一致。流式细胞仪分析表明,α-硫辛酸可促进肝癌细胞系BEL-7402、HepG2凋亡,凋亡率分别为24.70%和25.40%,p值均小于0.05,差异具有统计学意义。本研究通过对α-硫辛酸作用于肝癌细胞后的转录组进行测序分析,得到了大量转录本信息,测序结果高效、准确,可为研究α-硫辛酸诱导肝癌细胞凋亡的分子机制提供重要线索。
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