基于颜色判定的环介导等温扩增方法检测EV71

作者：戴颖; 刘峰涛; 何书; 汪奇伟

来源：现代免疫学, 2014, 34(02): 151-154.

• 逆转录-环介导等温扩增技术
• 肠道病毒71型
• 手足口病

建立了一种基于颜色判定的灵敏、快速和经济的逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)基因检测。针对EV71病毒VP1基因特异性序列的设计出6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准。进行特异性/灵敏度分析,同时与RT-PCR方法进行比较,并对93份疑似患者中咽拭子的病毒核酸进行了检测。通过颜色变化能观察到LAMP扩增产物的存在,且与柯萨奇病毒A16型(CA16)、轮状病毒、诺如病毒无交叉反应发生。所建立的RT-LAMP检测方法灵敏,灵敏度为500copy/tube,与定量PCR灵敏度相同。93份咽拭子标本中,RT-LAMP检测为46份阳性,荧光定量PCR检测有为44份阳性,二者统计学无显著差异。RTLAMP是一种快速、敏感、特异、经济的方法,适合用于基层医疗机构临床检测。

• 单位
  河南大学; 河南大学淮河医院