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摘要
麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱。为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要。本文研究了菌丝体浓度、溶壁酶浓度和酶解时间对原生质体形成的影响,并考察了该菌株对不同抗生素的敏感性,以期建立其遗传转化体系。结果表明,使用1%溶壁酶(5 mL)25℃酶解菌丝体(1g)2 h后,即可产生大量的原生质体。在PEG的介导下,以1.5 mg·mL-1的潮霉素B为筛选标记,转化质粒pAN7-1于原生质体,可获得大量转化子,PCR诊断证明外源基因已成功地整合到Cp-1菌株的基因组上。本研究为进一步改良Cp-1生产菌株奠定了重要的基础。
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单位中国医学科学院北京协和医学院; 药物研究所; 天然药物活性物质与功能国家重点实验室
