SD大鼠星形胶质细胞来源外泌体的提取及鉴定

作者：张文萍; 郑菊; 付燕林; 龙培艳; 吴昌学; 李毅; 齐晓岚; 官志忠; 肖雁^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z1: 2376-2381.

DOI：10.13417/j.gab.040.002376

• 星形胶质细胞
• 原代培养
• 外泌体
• 分离
• 鉴定

对原代培养的SD大鼠星形胶质细胞分泌的外泌体进行提取并鉴定。首先原代培养大鼠星形胶质细胞,免疫荧光鉴定星形胶质细胞标记性蛋白(胶质纤维酸性蛋白:glial fibrillary acidic protein, GFAP)以鉴定星形胶质细胞的纯度,然后采用超速离心法对大鼠原代星形胶质细胞培养上清液中的外泌体进行分离和提取;外泌体纳米微粒追踪技术检测所提取外泌体的粒径大小和浓度,透射电镜观察其形态特征,免疫印迹检测外泌体特异性标记物跨膜蛋白CD9、肿瘤易感蛋白(tumour-susceptibility protein, TSG101)、热休克蛋白70(heat shock proteins 70, Hsp70)、ALG-2相互作用蛋白X(ALG-2-interacting protein X, ALIX)蛋白的表达等方法对所提取的外泌体进行鉴定。纳米微粒追踪技术显示提取的外泌体平均大小为(107.6±44) nm,占比为99.1%,符合外泌体大小的标准,并且浓度较高;透射电镜观察到细胞培养上清液提取物中有典型呈杯托状的外泌体,其胞膜完整,含有低电子密度的物质;免疫印迹检测显示所提取物中有外泌体特异性蛋白CD9、TSG101、HSP70、ALIX的表达。实验结果表明,采用超速离心法能从大鼠原代星形胶质细胞培养上清液中提取得到高纯度的外泌体,为后续研究星形胶质细胞来源外泌体的功能提供了良好的实验基础。

• 单位
  贵州医科大学