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摘要
为了获得适用于节瓜SCoT-PCR反应的反应体系以及适用于该体系的SCoT引物,首先利用正交实验的方法对节瓜SCoT-PCR反应体系的三因素(模板, 2×san Taq PCR mix预混液,引物)的工作浓度进行优化。然后利用优化的节瓜SCoT-PCR反应体系对36条SCoT引物进行筛选,首次筛选到应用于节瓜中的SCoT引物,并对部分引物的退火温度进行优化。通过分析,确定了节瓜SCoT-PCR反应体系是DNA模板(25 ng/μL) 2.5μL、2×San Taq PCR mix预混液11μL、引物(10μmol/L) 2μL,筛选到了14条适合在节瓜的ISSR-PCR反应中应用的引物以及得到了它们的最适退火温度。与此同时,经验证该体系在节瓜应用具有良好的适用性、可靠性和稳定性。
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