干扰转酮醇酶的短发卡RNA表达载体的构建与筛选

作者：郭静; 刘瑞; 赵蕾; 钟春玖; 丰慧根

来源：新乡医学院学报, 2011, (04): 406-409.

• 转酮醇酶
• 短发卡RNA
• RNA干扰 transketolase
• short hairpin RNA
• RNA interference

目的筛选出干扰小鼠转酮醇酶(TK)的短发卡RNA(shRNA)表达载体。方法针对TK基因序列设计4条TK干扰序列:hMGFP-shRNA1、hMGFP-shRNA2、hMGFP-shRNA3、hMGFP-shRNA4,PstⅠ酶切鉴定其序列。然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,用逆转录-聚合酶链式反应和酶活性方法检测转染TKshRNA后Hepa1-6细胞内TK mRNA和蛋白表达变化。结果经酶切凝胶电泳证实shRNA载体构建正确,质粒筛选实验表明hMGFP-shRNA1质粒对TK基因的抑制作用最强。结论成功构建表达靶向TK的shRNA重组质粒载体。

• 单位
  复旦大学附属中山医院; 新乡医学院