鸡传染性喉气管炎病毒RPA-LFD检测方法的建立

作者：马国和; 高冬生; 王增; 杨盼盼; 杨霞; 王新卫^*; 边传周^*; 赵军^*

来源：中国预防兽医学报, 2018, 40(12): 1128-1132.

• 鸡传染性喉气管炎病毒
• 重组酶聚合酶扩增
• 侧向流试纸条
• 快速检测

为建立一种简便、快捷的现地检测鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的方法,本研究联合重组酶聚合酶扩增(RPA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RPA上、下游引物的5’端分别进行异硫氰酸荧光素和生物素标记,通过引物浓度、RPA反应时间和温度等条件的优化建立了一种可以用于ILTV现地检测的RPA-LFD方法。该检测方法在30℃～42.5℃恒温反应20 min即可实现对ILTV目的基因片段的有效扩增;与其它常见禽病病原DNA无交叉反应;RPA扩增产物直接用胶体金侧向流免疫层析试纸条肉眼观察,最低检测限为100拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高100倍。结果表明,本研究建立的RPA-LFD检测方法灵敏度高,操作方便,可用于ILTV的临床快速检测。

• 单位
  河南牧业经济学院; 河南农业大学