科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
【目的】研究橙皮苷阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其分子机制，为奶牛乳腺器官发育和维护提供理论依据。【方法】使用1000μmol/LH2O2处理奶牛乳腺上皮细胞8 h构建细胞凋亡模型，而后用120μg/mL橙皮苷处理细胞24h。采用CCK-8法测定细胞活性，使用共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，利用实时定量PCR(RT-qPCR)法测定细胞Bcl-2、Bax及Caspase3基因表达水平，使用免疫印迹(WesternBlot)技术检测Bcl-2、Bax及Caspase3的蛋白表达。【结果】(1)H2O2处理组奶牛乳腺上皮细胞活性极显著低于对照组(P<0.01，下同)，而发生细胞凋亡的细胞数目占比极显著高于对照组，且出现DNA梯状条带。橙皮苷组奶牛乳腺上皮细胞活性显著高于对照组(P<0.05，下同)，而细胞凋亡程度低。与H2O2处理组相比，H2O2+橙皮苷处理组奶牛乳腺上皮细胞活力显著上升，而发生细胞凋亡的细胞数占比极显著降低，且DNA梯状条带减少。(2)H2O2处理组Bax和Caspase3mRNA和蛋白表达显著高于对照组，而Bcl-2mRNA和蛋白表达显著低于对照组。橙皮苷处理组Bax和Caspase3mRNA和蛋白表达显著低于对照组，而Bcl-2mRNA和蛋白表达显著高于对照组。与H2O2处理组相比，H2O2+橙皮苷处理组Bax和Caspase3的mRNA和蛋白表达极显著下调，而 Bcl-2的mRNA和蛋白表达极显著上调。【结论】橙皮苷通过促进抗凋亡基因和蛋白表达(Bcl-2)和抑制促凋亡基因和蛋白表达(Bax和Caspase3)来阻抑H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。
- 单位
