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摘要
目的建立逆转录病毒介导的人Dll4基因RNA干扰体外表达体系并观察对骨肉瘤UMR106细胞的作用。方法将人Dll4基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒psilencer5.1-H1Retro中,构建成携带人Dll4基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Dll4,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染骨肉瘤细胞UMR106,用Westernblot分别检测对转染细胞人Dll4蛋白表达的影响。结果重组pSiR-NA-Dll4质粒经测序鉴定正确。重组逆转录病毒滴度可达221×104cfu/mL,感染UMR106骨肉瘤细胞3d能明显抑制细胞Dll4蛋白表达,其表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论成功构建了沉默Dll4表达的载体pSiRNA-Dll4,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞Dll4基因表达。
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