本发明提供了一种采用交叉引物恒温扩增技术检测产生肠毒素Hbl的蜡样芽孢杆菌的引物、试剂盒与方法。通过交叉引物恒温扩增反应对目标序列快速进行恒温扩增,在1h内就能获得阳性结果,同时由于该反应所需的引物较多,检测结果准确度极高。通过扩增反应是否发生就可判断靶基因的存在与否,从而完成了对蜡样芽孢杆菌肠毒素Hbl的特异性检测。解决了目前快速检测领域难以特异性检测出致病性蜡样芽孢杆菌的难题。该方法针对蜡样芽孢杆菌的检测限为6.0ng/μL,灵敏度是常规PCR的百倍以上。