基于特有基因VY93＿RS02885为靶标的滑液支原体qPCR检测方法建立

作者：徐彬; 张敬峰; 卢凤英; 孙华伟; 赵莎; 张晓曦; **涛; 张小飞^*

来源：江苏农业科学, 2021, 49(19): 183-189.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2021.19.033

• 滑液支原体
• 特有基因
• qPCR
• 检测方法

利用CD-HIT-EST快速聚类分析和BLASTN同源性比对共鉴定出17个滑液支原体(Mycoplasma synoviae)特有基因,并从中选取保守基因VY93RS02885作为分子诊断的靶标基因。根据该基因核苷酸序列设计了1对引物,建立了滑液支原体的SYBR green qPCR检测方法。结果表明,该方法对不同浓度的模板和对应的CT值具有较好的线性关系,R2值为0.998 8;该方法的特异性较好,BLASTN比对,检测引物对仅能匹配滑液支原体的特有基因VY93RS02885,结果显示,该方法能特异性地检测滑液支原体,与其他常见的引起禽关节炎的细菌/支原体性病原无交叉反应;该方法的敏感性较好,100%阳性检测的靶标基因最小拷贝数为10;该方法的重复性较好,对3个不同浓度的模板进行组间和组内重复检测,变异系数≤1.172 7%。此外,该方法对临床样品的检出率与传统检测方法相符。因此,本研究建立的针对滑液支原体特有基因的SYBR green qPCR检测方法具有用时短、特异性高、准确性高、敏感性高、可重复性强的优点,可为滑液支原体的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

• 单位
  农业部; 江苏省农业科学院