卵形鲳鲹TLR13基因的克隆、表达分析和亚细胞定位研究

作者：毛美琴; 蓝桢宇; 黄凤萍; 郭锡燚; 乐蒙; 胥鹏; 吴颖瑞; 彭银辉; 蔡小辉^*

来源：渔业科学进展, 2023, 44(03): 85-96.

DOI：10.19663/j.issn2095-9869.20220728001

• 卵形鲳鲹
• TLR13
• 基因克隆
• 表达谱
• 亚细胞定位

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一种古老的先天性免疫受体，参与病原体相关分子模式识别，对维持免疫稳态和预防感染至关重要。本研究克隆和鉴定了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)TLR13基因(命名为ToTLR13)，其开放阅读框(ORF)为1 269 bp，编码422个氨基酸，等电点为8.13。保守结构域分析显示，ToTLR13含有跨膜结构域(TM)、LRR结构域和TIR结构域，符合TLR家族的典型特征。通过建立TLR13保守域三级结构发现，ToTLR13与小鼠(Mus musculus)和大黄鱼(Larimichthys crocea) TLR13功能结构域的蛋白三级结构具有较高重叠性。多序列比对显示，ToTLR13与其他硬骨鱼TLR13具有较高的相似性，与其他纲物种的序列相似性较低。系统进化树结果显示，To TLR13与硬骨鱼TLR13聚在一起，其中与鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)最为接近，与哺乳动物、两栖类和贝类相分离。实时荧光定量PCR (Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)分析显示，ToTLR13在健康卵形鲳鲹的心、鳃、肾、头肾、肝、脾、脑和肌肉中普遍表达，其中鳃的表达量最高，其次是脾。ToTLR13在其鳃、脾、肝和肾免疫相关组织中的表达情况呈现出不同程度的上调，提示其经无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)免疫刺激后可能激活了炎症反应，启动了先天性免疫反应。亚细胞定位显示，ToTLR13定位于A549细胞质。本研究表明，ToTLR13在抵御病原菌免疫应答过程中可能发挥重要的作用，研究结果可为阐明脊椎动物TLRs的功能进化史提供基础资料。

• 单位
  北部湾大学