Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建

作者：蒋丹; 薛颢颖; 王苏; 杨奇超; 刘媛馨; 杨玲; 王东; 尹卫; 庄若; 钱唯韵; 赵双霞; 周丽斌; 袁国跃

来源：江苏大学学报(医学版), 2016, 26(02): 124-127+131.

DOI：10.13312/j.issn.1671-7783.y150283

• betatrophin
• 增强型绿色荧光蛋白
• 同源重组

目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础。方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含Bam HⅠ/AgeⅠ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长c DNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的GV314载体CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒p GV314-betatrophin;经Bam HⅠ/AgeⅠ双酶切后,与线性化的p DC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad-betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒。结果:阳性克隆质粒Ad-betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功构建了携带小鼠betatrophin基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体。

• 单位
  上海交通大学医学院附属瑞金医院; 上海交通大学医学院附属第九人民医院; 江苏大学附属医院; 苏州大学