金冠豆角籽粒中α-淀粉酶抑制剂的纯化及抑制动力学的研究

作者：孟成成; 宋永; 何鑫; 刘大军; 孙庆申^*

来源：食品安全质量检测学报, 2023, 14(12): 195-202.

DOI：10.19812/j.cnki.jfsq11-5956/ts.2023.12.013

• 淀粉酶抑制剂
• 金冠豆角籽粒
• 纯化
• 抑制类型

目的 提取金冠豆角籽粒中α-淀粉酶抑制剂(α-amylaseinhibitor,α-AI)并将其进行纯化,研究其抑制类型及抑制效果。方法 以金冠豆角籽粒为原料,通过Na Cl盐溶、(NH4)2SO4沉淀提取α-AI,使用G50、G75葡聚糖凝胶柱进行层析,用Na Cl洗脱液进行梯度洗脱,收集蛋白峰后,检测α-AI对猪胰淀粉酶的抑制活性;用Lineweaver-Burk双倒数绘图法和Michaelis-Menton方程分析酶反应动力学,探究α-AI的抑制类型。结果 金冠豆角籽粒中提取的α-AI蛋白含量为1.72mg/mL,对猪胰淀粉酶抑制率为84.20%,半抑制浓度(semi-inhibition concentration, IC50)为(6.77±0.63) mg/mL。不添加抑制剂组和添加抑制剂组的α-淀粉酶的酶解曲线几乎相交于原点,并且酶最大反应速率(Vmax)随着抑制剂浓度的增大而减小,米氏常数(Km)几乎不变。结论 α-AI与猪胰淀粉酶的结合呈现可逆型非竞争性抑制。

• 单位
  河北环境工程学院; 黑龙江大学; 生命科学学院