杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化

作者：冷阳; 刘世会^*; 赵懿琛^*; 赵德刚

来源：分子植物育种, 2020, 18(10): 3240-3245.

DOI：10.13271/j.mpb.018.003240

• 杜仲(Eucommia ulmoides)
• 糖基转移酶
• 原核表达
• 蛋白纯化

本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides) EuGT2基因为基础,利用基因重组技术构建原核表达载体pMCSG19-EuGT2。重组载体转化到E. coli Rosetta (DE3)中,用0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃下诱导6 h。使用镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。研究结果表明,杜仲EuGT2基因在E. coli Rosetta (DE3)中得到成功表达,重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白。经SDS-PAGE凝胶电泳检测,在相对分子质量约56 k D处有1条特异性蛋白条带,经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲EuGT2蛋白。以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据。

• 单位
  贵州省农业科学院; 贵州大学