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摘要
AFLP(Omt A)蛋白是黄曲霉毒素合成晚期的关键酶。用大肠杆菌表达的重组SUMO-AFLP融合蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,选取小鼠阳性血清的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选,筛选出可以稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。再用阳性细胞株制备腹水抗体,经辛酸-硫酸铵纯化抗体后,用间接ELISA、Western杂交等方法对抗体的特性进行鉴定。筛选出1株能稳定分泌抗AFLP单克隆抗体的细胞株3B4 3B10,亚类鉴定单抗为Ig G2a。间接ELISA法测定该细胞腹水抗体的效价为1∶256 000,Western杂交结果显示抗AFLP单克隆抗体能特异性识别AFLP重组蛋白及黄曲霉菌内的天然AFLP蛋白。用1μg·m L-1单克隆抗体检测AFLP蛋白,其线性检测范围为1.25957.335ng·m L-1,检测限为0.851ng·m L-1,R~=0.998 3。本文成功制备抗黄曲霉毒素合成中天然AFLP蛋白的单克隆抗体,特异性和灵敏度均较高,为进一步研究AFLP的表达及功能机制奠定了基础。
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单位中国农业科学院油料作物研究所; 农业部
