应用短发夹状RNA研究HBV X基因表达对三氧化二砷诱导HepG2细胞凋亡特性的影响

作者：贺兴鄂; 雷建华; 杨旭; 孙会卿; 童明

来源：中西医结合肝病杂志, 2008, (01): 27-31+4.

• 肝炎,病毒,乙型
• 基因,X
• 三氧化二砷
• HepG2细胞
• RNA干扰
• 细胞凋亡

目的:应用shRNA(短发夹状RNA)介导的RNA干扰研究HBV X基因表达对三氧化二砷(As2O3)诱导HepG2细胞凋亡特性的影响。方法:用噻唑蓝(MTT)还原法分析经2.0μmol/L As2O3处理的HepG2细胞和表达HBVX基因的HepG2-X细胞的生长抑制率。以未处理细胞为对照,流式细胞术分析细胞凋亡比和细胞周期,采用Caspase3/cpp32活性比色试剂盒测定As2O3处理后细胞裂解物中Caspase3的活性。应用脂质体介导HBX序列特异性shRNA表达载体pXi-1、pXi-2和序列无关对照pXi-3转染HepG2-X,再次分析细胞凋亡比、细胞周期和Caspase3活性的变化。结果:MTT法表明2.0μmol/L As2O3处理36小时具有理想的细胞生长抑制率。As2O3作用后细胞凋亡比明显增高(P<0.05),G2/M期细胞增多(P<0.05)。不同HBV X基因表达水平的细胞As2O3诱导的细胞凋亡比有统计学差异(P<0.05),HepG2-X与HepG2比较,其As2O3诱导的细胞凋亡比下降,且细胞裂解物的Caspase3活性下降(P<0.05),但应用序列特异性shRNA抑制HBV X基因表达后凋亡比和Caspase3活性可再次增高,而作为对照的序列无关的shRNA则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。结论:As2O3可诱导HepG2细胞凋亡。表达HBVX基因后As2O3诱导的HepG2细胞凋亡比和Caspas3活性下降,特异性shRNA抑制HBV X基因表达后则无此效应,但这种效应与细胞周期无关。

• 单位
  中南大学湘雅二医院