HBsAb靶向干扰素和IL-12双表达质粒pVAX-HBVE的构建与应用

作者：侯沙沙; 高燕; 王宇; 武帅; 朱晓明; 郭炳冉; 徐元基; 阎瑾琦; 于继云

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2014, 30(09): 921-924.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007086

• 乙型病毒性肝炎
• 免疫基因治疗剂
• HBsAb靶向性干扰素
• IFN-α
• hIL-12
• 真核表达

目的构建能同时表达HBsAb靶向干扰素(dsFvα)和人白细胞介素12(hIL-12)的新型基因治疗质粒pVAX-HBVE。方法将pEE14.1-dsFvα质粒双酶切获得dsFvα片段,克隆入经同样双酶切后的载体pVAX-IRES-hIL-12 IRES序列的上游,构建重组表达质粒命名为pVAX-HBVE。将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,ELISA检测目的基因表达;提取重组质粒pVAXHBVE,注射到乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转入1.3拷贝HBV全基因组的BALB/c小鼠体内HBV基因拷贝数的变化。结果 pVAX-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pVAX-HBVE 30μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级。结论成功构建能够含有靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的双表达质粒,为慢性乙肝基因治疗提供新的策略。

• 单位
  曲阜师范大学; 军事医学科学院基础医学研究所; 生命科学学院