三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用

作者：倪勤; 刘克洲; 羊正纲; 姚航平; 陈智

来源：浙江大学学报(工学版), 2005, (07): 1086-1090.

DOI：10.3785/j.issn.1008-973X.2005.07.036

• 小干扰核糖核酸(siRNA)
• 核糖核酸多聚酶III启动子
• 筛选
• 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子.

• 单位
  浙江大学医学院附属第一医院