内皮细胞中钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ激活对小鼠动脉粥样硬化的影响

作者：常旦琪; 冯鸿; 张光宇; 曹建雷; 李行; 王扬淦^*

来源：中华生物医学工程杂志, 2018, 24(05): 311-318.

• 氧化应激
• 动脉粥样硬化
• 内皮细胞功能障碍
• CaMKⅡ

目的探讨氧化应激诱导的内皮细胞钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)激活在动脉粥样硬化中的作用及机制。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CRL-1730,实验分4组:对照组、H2O2组、H2O2+KN93组和H2O2+KN92组,测定各组ROS水平、细胞活力、迁移能力、黏附能力,评价内皮细胞功能;RT-PCR测定notch-1、NF-κB、血管黏附分子1(VCAM-1)表达水平;Western Blotting测定CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、ox-CaMKⅡ、notch-1、NF-κB-p65、VCAM-1蛋白表达水平。取30只8周龄雄性ApoE (-/-)小鼠,随机分成3组:高脂组(n=10),高脂饮食且腹腔注射DMSO;高脂+KN93组(n=10),高脂饮食且腹腔注射KN93(10 mg-1·kg-1·d-1);高脂+KN92组(n=10),高脂饮食且腹腔注射KN92(10mg-1·kg-1·d-1)。记录各组体质量及血脂水平,进行主动脉根部HE染色,主动脉大体油红O染色,比较各组主动脉根部的斑块面积及主动脉脂质沉积。结果与H2O2组、H2O2+KN92组比较,H2O2+KN93组内皮细胞活力、迁移能力、黏附能力均有改善(P<0.05); RT-qRCR结果显示,H2O2+KN93组notch-1和VCAM-1 mRNA水平下调(P<0.05); Western Blotting结果显示,KN93处理明显降低了ox-CaMKⅡ、pCaMKⅡ、notch-1、NF-κB-p65、VCAM-1蛋白表达水平(P<0.05)。DAPT抑制notch-1未影响CaMKⅡ、oxCaMKⅡ、p-CaMKⅡ蛋白表达。KN93处理后的ApoE-/-小鼠主动脉根部的斑块面积(25.15±1.04)%及主动脉脂质沉积(12.70±0.89)%较对照组[(41.60±1.05)%、(25.28±1.77)%]和KN92组[(41.83±1.17)%、(25.57±0.78)%]明显减少,而各组之间小鼠体质量及血脂水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 KN93能通过CaMKⅡ/notch-1/NF-κB-p65/VCAM-1减弱内皮细胞功能紊乱,延缓动脉粥样硬化的发生发展。

• 单位
  武汉大学中南医院; 武汉大学人民医院