莱茵衣藻MAPK4基因RNAi载体的构建及鉴定

作者：王子贺; 邓晓东; 张阳; 费小雯

来源：安徽农业科学, 2017, 45(19): 126-129.

DOI：10.3969/j.issn.0517-6611.2017.19.043

• 莱茵衣藻
• MAPK4基因
• RNAi

[目的]构建莱茵衣藻2A38的MAPK4基因的RNAi载体。[方法]提取莱茵衣藻细胞总RNA,利用PCR扩增出编码MAPK4的基因片段,用基因工程技术将MAPK4基因片段连接载体p MD18-T上,经过2次不同的双酶切后,与RNAi中间载体p T282连接,最后连接到干涉载体p Maa7IR/XIR上,用酶切及测序鉴定MAPK4基因RNAi载体并转化莱茵衣藻。[结果]经限制性内切酶酶切及测序鉴定,证实为重组质粒,并且该重组载体可在莱茵衣藻中表达。[结论]构建的MAPK4基因RNAi载体结构正确,为进一步利用RNAi技术使MAPK4基因沉默表达,研究MAPK4在莱茵衣藻中的生物学功能奠定了试验基础。

• 单位
  中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 生命科学学院; 海南医学院